Karine Vanasse est née de Renée Gamache et Conrad Vanasse le 24 novembre 1983 à Drummondville. Elle est l'aînée d'une famille de trois enfants. Elle fait une première apparition télévisée à l'âge de 11 ans au concours de lip synch organisé par Le Club des 100 watts. Elle remporte le concours deux années d'affilées avec les chansons Illégal de Marjo et Des mots qui sonnent de
Céline Dion.
En 1997, elle joue dans l'épisode La veuve noire, de la série télévisée jeunesse La courte échelle, ainsi que dans la production franco-canadienne Un hiver de tourmente. Elle joue également dans la minisérie Revenge of the Land. Remarquée par l'équipe des Débrouillards, elle est invitée à participer à l'émission scientifique hebdomadaire animée par Gregory Charles. Elle y sera trois ans.
En 1999, Karine Vanasse est acclamée par les critiques cinématographiques pour son rôle d'adolescente dans Emporte-moi de Léa Pool. Elle recevra plusieurs prix et nominations pour ce rôle. La même année, elle joue dans la télésérie 2 frères (1999-2000) de Louis Choquette, qui lui vaudra également des prix.
En 2000, elle joue dans Du pic au coeur, où elle tient le rôle principale et interprète la chanson-thème. À l'automne 2002, Karine interprète Donalda Laloge dans Un homme et son péché de Charles Binamé. Pour ce rôle, elle remportera le Jutra de la « Meilleure actrice » et sera désignée « Femme de l'année » par le magazine Châtelaine. La même année,
Denise Filiatrault lui offre le rôle principal dans la comédie musicale Irma la douce.
En 2003, elle a un rôle de soutien dans le film Head in the Clouds aux côtés de
Charlize Theron et
Penelope Cruz. En 2004-2005, elle joue le rôle principal du film Sans elle de Jean Beaudin, de la télésérie Un homme mort de Fabienne Larouche et dans la télésérie canadienne October, 1970.
En 2006, le magazine Entreprendre la sélectionne pour être l'une des 101 femmes leaders du Québec, côtoyant d'autres célébrités comme
Céline Dion, la gouverneure Générale du Canada Michaëlle Jean et la productrice Denise Robert. La même année, elle reçoit le prix « Femme de mérite » décerné par la Fondation Y des femmes de Montréal. En 2007, elle joue dans le film Ma fille, mon ange aux côtés de l'acteur Michel Côté.
En 2007, Karine devient coproductrice à la maison de production Remstar pour développer un projet de film sur la tuerie de l'École polytechnique de Montréal. Le film Polytechnique, réalisé par Denis Villeneuve, sort en 2009. Il mérite à Vanasse le Génie de la meilleure interprétation féminine dans un premier rôle.
En mars 2009, elle anime la 11e soirée des Jutra, un gala qui sera qualifié de « terne et sans spontanéité » par Le Journal de Montréal.
En mai 2010, Karine Vanasse prend l'affiche dans le film L'Enfant prodige de Luc Dionne
En avril 2010, La Presse canadienne annonce que Karine Vanasse devrait apparaitre dans le thriller Angle mort, réalisé par Dominic James et qui devrait sortir en février 2011. L'organisme annonce également que l'actrice jouera au théâtre Rideau Vert du 8 février au 12 mars. Elle tiendra le premier rôle dans In extremis, version française de Extremities, une pièce du dramaturge américain William Mastrosimone.
À titre de productrice, elle travaille à adapter la bande dessinée Paul à Québec de Michel Rabagliati.,.